Laboratorio




DIAGNÓSTICO PARASITOLÓGICO

Nemátodos:

El parasitismo gastrointestinal es una de las principales causas de disminución de la producción en los sistemas ganaderos en pastoreo. Afecta principalmente a animales menores de 2 años y se caracteriza por producir baja ganancia de peso, hipoproteinemia, anemia (Dependiendo el género parasitario) pudiendo llevar a la muerte del animal.

Existen diferentes especies de parásitos que afectan determinadas porciones del tracto digestivo, siendo Ostertagia ostertagi la especie más patógena para el bovino seguida de Trichostrongylus axei, Cooperia punctata y Haemonchus placei . En ovinos Haemonchus contortus es el principal parásito asociado a casos de anemia y mortandad y Trichostrongylus colubriformis, T. axei y Teladorsagia circumcincta están asociados a los casos de diarrea.

Diagnóstico: El diagnóstico de esta enfermedad se basa en el recuento de huevos por gramo en la materia fecal ( HPG ), y en el cultivo e identificación de larvas 3 para establecer los géneros parasitarios.

Muestra: Materia fecal individual del lote afectado. (No menos de 7 a 10 animales por lote para poder realizar una buena interpretación de los resultados)

Acondicionamiento: refrigerado (NO CONGELAR)  

Resistencia Antihelmíntica : el uso de antiparasitarios lleva tarde o temprano a la selección de parásitos resistentes a los diferentes grupos químicos de drogas. El uso de drogas como única herramienta de control, sumado muchas veces a la excesiva utilización de las mismas, acelera estos procesos de selección.
En los últimos años las lactonas macrocíclicas (Ivermectinas, abamectinas etc.) han sido adoptadas por su amplio espectro y por su facilidad de aplicación, pero ya se están detectando cada vez con más frecuencia, establecimientos con grados variables de resistencia a algunos géneros parasitarios. Este fenómeno se acentúa en el norte argentino donde este grupo de drogas se utiliza también para el control de garrapatas.

Un diagnóstico precoz de la situación permite corregir el problema, cambiando de grupo químico de antiparasitario con eficacia adecuada, realizando desparasitaciones estratégicas en base a los conocimientos epidemiológicos locales y seguimientos de tropas y disminuyendo el uso de drogas para el control
Existe un test diagnóstico (TRRH - Test de Reducción de Recuento de Huevos) que permite evaluar la eficacia de los diferentes grupos químicos de drogas contra los diferentes géneros parasitarios.
Algo mucho más sencillo y más precoz es realizar análisis de materia fecal post tratamiento (7 a 12 días en caso de bencimidazoles, closantel o levamisol,) y entre 18 y 20 días para lactonas macrocíclicas). Este procedimiento puede realizarse luego de cada desparasitación para ver el comportamiento de las drogas en cada establecimiento en particular.  


Teniasis:

La teniasis de los rumiantes, es causada en nuestro país principalmente por las especies Moniezia expansa y M. benedeni ( Afectando principalmente el intestino delgado de los ovinos y bovinos jóvenes). Su patogenicidad ha sido tema de controversia, pero ante infestaciones masivas en animales jóvenes se han llegado a reportar casos de mortandad por este parásito. Thysanosoma actinoides es otra tenia que afecta el hígado de ovinos llegando a producir trastornos en la producción. Thysaniezia giardi afecta el intestino de los rumiantes.

Diagnóstico: El diagnóstico de esta enfermedad se basa en la presencia de huevos en la materia fecal y la diferenciación morfológica del huevo.
Muestra: Materia fecal individual del lote afectado. (no menos de 7 a 10 animales por lote para poder realizar una buena interpretación de los resultados)
Acondicionamiento: refrigerado (NO CONGELAR)  


Fasciolosis:


Fasciola hepática
es un parásito que afecta el hígado de varios mamíferos, produciendo síndromes agudos y/o crónicos que se caracterizan por anemia e hipoproteinemia. Frecuentemente esta enfermedad puede terminar con la vida del animal o favorecer el desarrollo de otra enfermedad como es la Hemoglobuniria bacilar. El parásito es de ciclo indirecto, para el cual necesita un hospedador intermediario (caracol Lymnaea viatrix principalmente) que vive en arroyos o campos inundables. Los ovinos son más susceptibles a la infección y pueden permanecer infectados toda su vida.
Paramphistomun spp. es otro trematode con un ciclo similar al de F asciola aunque su estado adulto coloniza la mucosa del rumen y retículo. La patogenicidad de esta especie es mucho menor que la de Fasciola , aunque existen casos citados con mortandad de terneros, debido a migración masiva de estadíos inmaduros a través del intestino delgado y cuajo.

Diagnóstico: El diagnóstico de esta enfermedad se basa en la presencia de huevos en la materia fecal. El diagnóstico de situación se puede establecer en base a la prevalencia en el rodeo y a los recuentos individuales.
Muestra: Materia fecal individual del lote afectado (No menos de 7 o 10 animales por lote para poder realizar una buena interpretación de los resultados).
Diagnóstico de la presencia de enfermedad: Pooles de muestra (3-5 animales por pool.
Acondicionamiento: refrigerado (NO CONGELAR)

Coccidiosis:

Bovinos: La coccidiosis bovina es causada principalmente por E. bovis y E. zuernii . Afecta generalmente a animales menores de 1 año de edad y se caracteriza por anorexia, diarrea y deshidratación. Estros protozoos afectan principalmente el intestino grueso (ciego y colon) destruyendo el epitelio y provocando diarrea sanguinolenta en los casos más severos. Existen otras especies de menor patogenicidad que pueden llegar a dar cuadros de diarrea en terneros. Animales criados en forma intensiva están más propensos a sufrir esta enfermedad.
Ovinos y caprinos: La coccidiosis afecta a corderos y cabritos principalmente en sistemas intensivos de producción. Existen especies con diferentes grados de patogenicidad, y clínicamente se caracterizan por anorexia, deshidratación y diarreas que en algunos casos es sanguinolenta.

Diagnóstico: El diagnóstico de esta enfermedad se basa en el recuento de ooquistes por gramo en la materia fecal (Opg.), y en la identificación de especies para establecer la patogenicidad de las mimas.
Muestra: Materia fecal individual del lote afectado. (No menos de 7 a 10 animales por lote para poder realizar una buena interpretación de los resultados).
Acondicionamiento: Refrigerado (NO CONGELAR).

 

Cryptosporidiosis :

Esta enfermedad afecta principalmente a animales menores de 1 mes de vida, siendo uno de los agentes incluidos dentro del grupo de las diarreas neonatales de los terneros. Varias especies de mamíferos pueden verse afectadas por esta enfermedad, siendo importante por su carácter zoonótico.
Suele existir alta prevalencia de infección en terneros menores de 1 mes de vida, en rodeos sin problemas de diarrea, por lo que la sola presencia de ooquistes no significa que los animales estén sufriendo la enfermedad.

Diagnóstico: El diagnóstico de esta enfermedad se basa en la presencia de ooquistes puestos de manifiesto mediante tinción de Ziehl Neelsen modificada.
Muestra: Materia fecal individual del lote afectado. (No menos de 7 a 10 animales por lote para poder realizar una buena interpretación de los resultados).
Acondicionamiento: Refrigerado (NO CONGELAR)

 

IDENTIFICACIÓN DE ECTOPARÁSITOS:

Existen gran cantidad de ectoparásitos que suelen afectar a los animales domésticos. Sin dudas las garrapatas, piojos, sarna y moscas suelen ser verdaderos problemas en algunos establecimientos. El tratamiento frecuente en algunas áreas de nuestro país ha ido generando resistencia de grado variable lo que hace cada vez más complicado el manejo de alguna de estas enfermedades.

Muestra: Piojos, garrapatas : recolectar varios ejemplares (En lo posible incluir varios estadíos) y ponerlos en un tubo que contenga pasto o algodón húmedo. No exponer a temperaturas extremas ni a luz solar directa. Enviar al laboratorio.(No es necesario que venga refrigerado).

Prueba de Drummond para diagnóstico de resistencia en garrapatas (Consultar tipo de muestra) .
 

Moscas: Enviar moscas adultas o larvas en un recipiente con alcohol 70%.

Adjuntar historia clínica indicando especie, lugar de la lesión, tipo (Miiasis superficial, profunda, cavitaria, etc.)

Sarna: Realizar raspaje profundo de piel del borde de la lesión con un bisturí y recolectarlo en un recipiente hermético. Incluir costras. Tomar muestra de varias áreas lesionadas.

Hemoparásitos :

La babesiosis y anaplasmosis son enfermedades transmitidas por garrapatas (b. microplus ) y en el caso de anaplasmas se pueden sumar otros insectos hematófagos. Estas enfermedades se caracterizan por producir destrucción de glóbulos rojos y clínicamente caracterizadas por fiebre, anemia, ictericia, hemoglobinuria (Babesiosis) e incluso signos nerviosos (b. bovis).

Diagnóstico: se basa en la historia clínica, hallazgos de necropsia y en la demostración del agente en la sangre mediante tinciones. Muestra: Tinción: 2-3 frotis de sangre (En lo posible de vena yugular y de vena coccígea).
Sangre con anticoagulante de vena yugular y coccígea.
En caso de necropsia incluir también frotis de bazo hígado y del cerebro.
Serología: enviar suero de varios animales del rodeo.

 

NEOSPOROSIS Y TOXOPLASMOSIS:

Estos parásitos están relacionados principalmente a pérdidas reproductivas en bovinos y ovinos respectivamente. N. Caninum tiene como hospedador definitivo al perro , pero en el hospedador intermediario (Vacas) se transmite tanto en forma vertical como horizontal y suele presentarse como tormentas de abortos durante el 2do y 3er tercio de la gestación en rodeos. Toxoplasma gondii cuyo hospedador definitivo (Gato) no manifiesta síntomas de enfermedad, afecta principalmente hospedadores intermediarios (ovinos y caprinos) en donde suele producir abortos tardíos.

Muestra: Serología: 3-5ml sangre entera.
Histopatología: Cerebro, corazón.

 

COPROLÓGICO CANINO/FELINO:

Ancylostoma caninum es el parásito más frecuente en animales adultos y puede causar severa sintomatología clínica caracterizada por anemia. Trichuris vulpis es un parásito que coloniza el intestino grueso de los animales y suele irritar las mucosas del ciego y colon. En cachorros, los ascaridios suelen ser responsables de problemas digestivos, junto con Giardia spp. e Isospora spp. Dentro de los cestodes, Dipylidium caninum es el más frecuente, no obstante estos carnívoros suelen albergar otras especies de tenias.

Diagnóstico: El diagnóstico de esta enfermedad se basa en la presencia de huevos (Nematodes, cestodes), ooquistes ( I sospora ) o quistes (G iardia ).
Muestra: La muestra recogida se mantiene con formol o refrigerada. Puede realizarse un muestreo seriado por 2 o 3 días consecutivo.
En caso de sospecha de Giardia , se recomienda mandar muestra fresca para la búsqueda de trofozoitos vivos.
Acondicionamiento: Refrigerado (NO CONGELAR)

 


DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO

El aislamiento, cultivo e identificación de gérmenes patógenos es una herramienta que ayuda en muchos casos a confirmar diagnósticos de necropsia o clínicos, y permite implementar un tratamiento específico en base a la bacteria actuante. Además ante casos particulares el antibiograma nos permite conocer qué tipo de antibiótico tiene actividad frente a la misma.

La realización de tinciones para ver aspectos morfológicos y pruebas bioquímicas nos permite en muchos casos llegar a la diferenciación de especie.

La presencia de anticuerpos en un animal indica que el mismo a tenido contacto previo con el agente patógeno. La seroconversión nos permite inferir que ese contacto ha sido en un determinado momento, si conocemos la dinámica de la curva de anticuerpos para determinada enfermedad. Esto permite en algunos casos inferir que algún evento (aborto, etc) puede estar relacionado al momento de infección o bacteriemia.

Tener presente que si el animal fue tratado con antibióticos puede inhibir el desarrollo de las bacterias en el medio de cultivo.


Diagnostico serológico ( Inmunodifusión en gel de agar, microaglutinación (Leptospira), BPA, FPA, Wright -2ME) :3-5 ml sangre entera refrigerada

Muestra Clínica: tomar una muestra con hisopo estéril (Preferiblemente con medio de transporte). En caso de líquido (Orina, punción, etc.) puede enviarse en la jeringa refrigerada.  

Material de necropsia : Deben en lo posible ser obtenidas de un animal recién muerto o sacrificado para evitar la contaminación y el desarrollo de bacterias saprófitas que limitan el desarrollo de las patógenas. Tomar la muestra del órgano correspondiente a medida que se va abriendo las cavidades del animal para evitar contaminación.

Muestras: de líquidos tomadas en forma estéril (suero, orina, bilis y líquido cefalorraquídeo etc), pueden ser enviadas en la jeringa con la que se muestreó

Pueden enviarse trozos de órganos para aislamiento bacteriológico incluidas en bolsas de nylon o recipientes estériles.

Carbunco: Enviar hueso largo y frotis de sangre o bazo del animal sospechoso.

Acondicionamiento: poner rápidamente en recipiente hermético (no permeable) refrigerado para frenar los procesos de autólisis/putrefacción (NO CONGELAR)

Recuerde que cuanto más prolijo es en la toma de muestra, más posibilidadess hay de que no se produzcan contaminaciones que puedan interferir con el correcto diagnóstico.

MICOLOGÍA:

en caso de sospecha de hongos, enviar hisopo (Lesiones exudativas) o costras en bolsas de nylon o recipientes estériles (Lesiones cutáneas).

Acondicionamiento: Enviar refrigerado.

   


VIROLOGÍA

Gran cantidad de virus afectan a los animales domésticos siendo causales de diferentes patologías. Para el diagnóstico de enfermedades virales existe la posibilidad del aislamiento y tipificación del mismo, como así también la posibilidad de detectar anticuerpos específicos que genera el organismo luego de tomar contacto con el mismo.

Existen también, en casos particulares, la posibilidad de detectar partículas virales mediante microscopía electrónica o en base a técnicas moleculares.

La presencia de anticuerpos específicos en un animal, sólo indica que el mismo ha tenido contacto previo con el agente patógeno. La seroconversión nos permite inferir que ese contacto ha sido en un determinado momento, si conocemos la dinámica de la curva de anticuerpos para determinada enfermedad. Esto permite en algunos casos inferir que algún evento (Aborto, etc.) puede estar relacionado al pasaje viral.  

 

DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO

(ELISA, Inmunodifusión en gel de agar, virus neutralización): 3-5 ml sangre entera libre de hemólisis.


En caso de muestras pareadas realizar el segundo sangrado a los 20-30 días y procesar los dos muestreos juntos . (Mantener congelado el 1er muestreo).

Aislamiento viral: consultar

Aislamiento: Consultar.

Acondicionamiento: Enviar la sangre entera refrigerada o el suero congelado.

 

   


ENFERMEDADES VENEREAS


TRICHOMONIASIS


La trichomoniasis es una enfermedad parasitaria producida por protozoos parásitos llamados tritrichomonas foetus . Estos parásitos colonizan la mucosa del pene y prepucio del toro sin producir sintomatología en los machos, pero cuando este animal monta a una hembra le transmite la enfermedad, causando en ésta la muerte y reabsorción embrionaria, generalmente antes de las 16 semanas de gestación, por lo cual el principal síntoma que vemos en el rodeo es la repetición de servicio. En ocasiones puede presentar abortos y piómetras que pueden ser detectadas al momento del tacto. El principal síntoma en el rodeo es infertilidad temporaria, con bajo % de preñez, que suele verse principalmente en vaquillonas cuando es un rodeo infectado, o en todas las categorías por igual cuando la enfermedad entra en un rodeo libre de enfermedad(Animales sin inmunidad frente al parásito).

El diagnóstico se basa en la demostración, mediante cultivo del parásito en condiciones de laboratorio. Para ello se realiza el muestreo de toros , vacas abortadas, e incluso fetos. Las muestras recogidas son sembradas en medios de cultivo que permiten la multiplicación del parásito lo que permite que sean detectados al microscopio.

La sensibilidad de la prueba aumenta a medida que aumentamos la cantidad de raspajes prepuciales en el toro. Cerca del 85-90% con 1 muestreo y con 2 muestreos detectamos el 95-96% de los animales infectados, aunque estos valores varían en cada caso en particular según el operario, contaminación de la muestra y la calidad del medio de cultivo.


En cuanto a la especificidad, en el cultivo pueden aparecer otros flagelados que en algunos casos son similares a las trichomonas, pero que pueden diferenciarse mediante una tinción y recuento de flagelos. Es por ello que de rutina estamos implementando la tinción de todas las muestras positivas.

Muestra: Una vez sembrado el raspaje o el material recogido mediante pipeta en el medio de cultivo previamente templado, éste NO debe ser refrigerado nuevamente . Enviar al laboratorio lo antes posible y si se envía junto con muestras que necesitan frío, tratar de separar lo mejor posible del refrigerante. En caso de que el trabajo de campo lleve más de 1 día, las muestras pueden mantenerse en un lugar templado (Entre 20°C y 37°C) hasta completar el trabajo, recomendando que no pase más de 48 hs. hasta la llegada al laboratorio.

Se producen fluctuaciones en el n° de T. foetus , que colonizan el prepucio de los toros a lo largo del tiempo, alternándose momentos de alta y baja cantidad de trichomonas en el prepucio lo que puede influir al momento del muestreo. Es por eso que se recomienda realizar muestreos separados al menos por 7 a 10 días.

CAMPYLOBACTERIOSIS

Es una enfermedad causada principalmente por Campylobacter fetus subsp venerealis. Al igual que lo que sucede con la trichomoniasis cursa en forma asintomática en el toro pero en las hembras se produce muerte embrionaria, infertilidad temporaria y abortos.

Los signos en el rodeo se manifiestan como repeticiones de celo, bajo porcentaje de preñez y abortos. La infección ingresa a un rodeo (al igual que en la trichomoniasis) principalmente por la entrada a un establecimiento de un toro portador, ya sea por la compra del mismo sin la sanidad correspondiente o a través del alambrado perimetral. Lo mismo puede suceder con la compra de hembras de origen desconocido.

El diagnóstico de la enfermedad se basa en la identificación de la bacteria mediante inmunofluorescencia directa. El éxito del diagnóstico depende de la cantidad de bacterias que podamos recuperar en la maniobra del muestreo, ya que a diferencia de trichomonas, el medio de cultivo tiene fenol que actúa como conservante y mata a las bacterias.

Se necesitan al menos 2 muestreos consecutivos negativos si el animal proviene de un rodeo libre de la enfermedad para asegurarnos de que realmente es Negativo.

En caso de rodeos infectados suelen necesitarse más muestreos para garantizar la negatividad del animal. Este mismo concepto rige para la trichomoniasis.

Muestra: Una vez sembrado el raspaje o el material recogido mediante pipeta en el medio de transporte, no es necesario mandar refrigerado. (Normalmente se manda junto con las trichomonas sin refrigerar).

Se producen fluctuaciones en el n° de C. fetus , que colonizan el prepucio de los toros, alternando momentos en los cuales hay un elevado n° de bacterias en el prepucio con otros en los cuales se recuperan muy poco material, lo que puede afectar la sensibilidad del diagnóstico. Es por eso que se recomienda realizar muestreos separados al menos por 7 a 10 días.

 

   
 


NECROPSIA /HISTOPATOLOGIA

La necropsia como herramienta diagnóstica suele ser de gran ayuda cuando nos encontramos frente a un caso de mortandad. Cuando ésta es realizada en el lugar donde murió el animal, permite al profesional la posibilidad de obtener datos complementarios del caso (observar el terreno, al resto de los animales del lote, la presencia de plantas tóxicas etc), que muchas veces son importantes a la hora de plantearse las hipótesis de muerte.

Muchas veces las lesiones macroscópicas suelen orientar a diversas patologías las cuales pueden ser confirmadas mediante el estudio microscópico de diferentes órganos y tejidos.

Para ambos casos, es muy importante que el animal al que se le práctica la necropsia y extrae la muestra no presente marcados cambios post mortem. Estos cambios suelen ser muy acelerados con elevada temperatura ambiente llevando a la rápida descomposición del cadáver en algunos casos en menos de 6 horas de muerto en verano.

Muestra:
Histopatología: tomar cortes delgados con elemento bien filoso (preferentemente bisturí) para no desgarrar al cortar. Las muestras deben incluir parte aparentemente sana y parte de la lesión que se desea investigar y no superar 1 cm de espesor.


Evitar apretar o tocar la muestra con pinza o los dedos para no alterar la estructura del órgano

Fijar en formol al 10% (1 parte de formol comercial al 40% + 9 partes de agua)

La relación formol al 10% y muestra también debe ser de 10 a 1 .

•  Para fijar El SNC (cerebro y cerebelo); se le deben realizar 2-3 cortes longitudinales hasta las 2/3 partes de su espesor, o sea, que los cortes no serán completos.

•  Luego de poner la muestras en el frasco, si alguna pieza muestreada flota, agregar algodón para asegurarse de que la misma se sumerja completamente en el fijador.

Acondicionamiento: Las muestras para histopatología deben enviarse en frascos herméticos y separadas del resto de las muestras enviadas para virología Bacteriología o parasitología. Enviar historia del caso y describiendo las lesiones macroscópicas y el detalle de las muestras enviadas .

 

   
 


MINERALES:

Varias enfermedades suelen estar relacionadas a la falta o al exceso de macro y micro elementos. Las consecuencias orgánicas suelen ser muy variadas dependiendo del caso particular y en muchos lugares se debe a la falta o al exceso de los mismos en el agua y/o alimento o al aumento de demanda en algunas etapas fisiológicas del animal.

Cobre, Calcio, Fósforo, Magnesio y Zinc son algunos de los más importantes y la medición de los mismos puede realizarse en suero, plasma e incluso el alimento.

Muestra: Determinación de concentración plasmática: Las muestras de sangre deben ser completamente LIBRE DE HEMÓLISIS (esto es muy importante ya que la destrucción de los glóbulos rojos altera significativamente los resultados enmascarando el resultado verdadero).

Siempre utilizar tubos limpios de minerales, los cuales pueden ser solicitados al laboratorio, o bien tubos plásticos descartables o de vidrio, sin tapones de goma que desprenden minerales, y bien acondicionados (Lavarlos con detergente no iónico y enjuagarlos con agua destilada de la mayor calidad posible).


El volumen de sangre debe ser de al menos 5ml lo cual permite asegurarse un remanente de suero o plasma que luego puede ser utilizado para otras determinaciones evitando la necesidad de un nuevo muestreo.

Las muestras de sangre entera deben remitirse refrigeradas (Nunca congelarlas) siempre y cuando lleguen al laboratorio antes de las 24 hs de tomadas. Pasado este lapso se recomienda extraer el suero o bien el plasma, que puede ser congelado y luego enviarlo al laboratorio con refrigerantes.

Análisis de minerales en alimentos: consultar

   




BIOQUÍMICA CLÍNICA


El análisis bioquímico es una herramienta que permite acercar al diagnóstico veterinario. Ciertas patologías se caracterizan por alterar la concentración plasmática de enzimas o modificar el hemograma o hepatograma normal. El análisis de orina permite ver si el órgano esta funcionando bien o presenta alguna anormalidad.

Muestra: Hemograma: sangre con anticoagulante (20ul de EDTA para 2ml de sangre) respetar proporción.

Hepatograma, glucemia, uremia, creatininemia : 3ml de sangre entera (Libre de Hemólisis).

Orina completa: 5-10 ml de orina (Preferentemente extraída con sonda).

Acondicionamiento : enviar refrigerado lo antes posible al laboratorio




ANÁLISIS DE AGUA

El análisis fisicoquímico y bacteriológico del agua permite establecer la calidad de la misma y encuadrarla dentro del estatus de potable o no potable. La presencia de ciertas bacterias permite inferir que el agua ha tenido contacto con materia fecal (animal o humana), lo que pone en riesgo a la población que consume la misma.

Muestra: Agua de red/cañería : flamear la canilla y posteriormente dejar correr por al menos 2-3 minutos agua y luego tomar la muestra.

La muestra debe ser recolectada en envases estériles (Solicitar al laboratorio) en un volumen no inferior a los 500 ml.

Acondicionamiento: Enviar lo antes posible al laboratorio.